· poliakrilamidGel mora akrilamid monomerom, polimerizacijskim početnim materijalom, katalizatorom i desno od smjese soli i međuspremnika zajedno.
· akrilamidi bis (n, n '- metilen dvostruki akrim) je motromer obrasca gela matrice.
· Amonijum perspektivni proces za pokretanje lepljivog polimerizacije. Formulacija ljepila zahtijeva 10% amonijum-frulfate rješenje pripremljene u vodi. Većina podataka pokazala je potrebu za aktivnom upotrebom. Međutim, rešenje od 10% može se staviti u 4 ℃ nekoliko tjedana bez značajnog gubitka aktivnosti. Napravite do 10 ml i odbacite kada ljepilo ne uspije objediniti.
Savjet: postotak odakrilamidU sekvenciranju ljepila i ljepila proteina nije isto. Ako koristite premjeder akrilamid: BIS rješenje, obavezno nabavite pravu bocu.
· Temered (n, n, n ', n' - tetrametil etilendiamine) je katalizator, u smeđoj bočici, smještenoj u hladnjaku. Dodaj neposredno prije izlijevanja ljepila.
· Poliakrilamidna elektroforeza Rabljena stakla u elektroforezi treba oprati prije i nakon svaki put. Nakon elektroforeze, operite mekom četkom i krpom u vrućoj sapunici, isperite destiliranom vodom i štandu da se osušite.
· Vlaga i prašina mogu uzrokovati šuplju polimeru. Prije elektroforeze očistite staklenu ploču čišćenjem stakla i obrišite je mekom četkom. Operite destilovanom vodom i temeljito osušite papirnim obrisom. Ispiranje sa 70% etanola prije brisanja s papirom pomaže u čišćenju i ubrzavanju sušenja. Dodajte uzorke akrilamida sukcesivno: bis, voda, pufer rješenje, amonijum persulfat, teme. Dobro se protresite i odmah sipajte.
Prije polimerizacije nije potrebno degass poliakrilamid. (Akrilamid se nekada postavljao u vakuum za uklanjanje mjehurića jer kiseonik inhibira polimerizaciju.)
Savjeti za uzorke horizontalnog ljepila.
· Stavite komad crnog papira u donju kutiju, crna pozadina da biste napravili malo rupe uzorka da biste vidjeli jasnije.
· Leplonizerpan pufer napunjen, pre samo koloidom.
· Ako rub ima svjetlo, uključite svjetla, neka svjetlost obasja koloida. Nacrtajte uzorak u pipetu.
· Korištenje automatskog pipetinga.
· U 10-200 MU 1 Pokretna tačka tečnosti može se koristiti u većini točaka na uzorku. Za vrlo male rupe uzorka (manje od 10 μ1), dugačka pipeta glava koja se koristi za sekvenciranje ljepila je prikladnije.
· Pipeting je upravo uronjen u uzorku, udisanje polako pokretne tekućine. Uzorak se može pojaviti ljepljivim glicerin, a brzo pumpanje može crpiti mjehuriće zraka u glavu pipeta.
· Uzorci nakon udisanja pipeting glave, pomaknut će se glavom tečnosti na rubu cijevi ili brisanjem papira sisati tekuću glavu izvan kapljica. Pazite da ne usisavate uzorak.
Stavite uzorak u otvor za uzorke
· Plopeti uređaj za održavanje malog pritiska, napravite uzorke lagano pomaknite prelivu tekuće glave.
· Glava pipetiranja umetnuta u tampon, malo viši od spot rupa, održavati pozitivan pritisak. Vrh pipete može se umetnuti u malu rupu.
· Polako i postojano uzorci napolje. Vrh pipete postavljen je iznad rupe uzorka točke, a uzorak će potonuti u rupu. Ostavite da uzorci tone da napuni rupu uzorka umjesto da se gurate unutra.
· Jednom poslednju kap uzorka sa tečnom glavom, tečnost će se preseliti u drugu nogu, polako podići tečni potez, pomaknite se iz tampon
Kako napraviti vertikalno uzorkovanje ljepila?
· Vertikalna uzorka uzorka za ljepila formirana između dva komada stakla. U vrlo tankom ljepilo, glava pipete ne može se umetnuti između dvije staklene ploče. Gledajte glicerin! Stavite glavu pipete preko rupe uzorka i uzorak će potonuti u rupu.
· Uzorak točke prije, budite sigurni da se vertikalna točka polipropilenske acil gel uzorka otvori otkucana čist. Operite akrilamid bez rasperisanog akrila i vode koji se mogu pojaviti na dnu rupe uzorka. Voda može učiniti rupu uzorka znatno manjim. Koristite špricu od 25 ml ili 50 ml i iglu od 18 mjerača. Sipajte u međuspremnik elektroforeze i pažljivo isperite rupu uzorka.
· Može biti teško vidjeti rupu uzorka, ali isto, ostalo je jednostavno. Ako postoje suvišne rupe, pufer uzoraka može se testirati s BROMOPHENOL BLUE.
Pošta: Mar-31-2023